elisa檢測試劑盒 Elisa實(shí)驗(yàn)中應(yīng)該注意的問題,包括樣品稀釋、試劑盒平衡、樣品和試劑的混勻、加樣、溫育等問題.Elisa試劑盒有著準(zhǔn)確性高、靈敏度高、特異性強(qiáng)的諸多優(yōu)點(diǎn),深受廣大用戶朋友的喜愛.然而,在實(shí)驗(yàn)過程中,也需要注意很多問題.對此,需要遵守一些規(guī)則,才能更好地進(jìn)行實(shí)驗(yàn),取得較好的實(shí)驗(yàn)成果.

Elisa方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測定.在Elisa測定中影響因素較多,在檢測過程中除正常反應(yīng)外,有時(shí)常見到一些錯誤的結(jié)果.引起ELISA測定錯誤結(jié)果的原因主要有：標(biāo)本因素；試劑因素；操作因素.

1.樣品稀釋 ；一般產(chǎn)品的樣品稀釋倍數(shù)均通過大量試驗(yàn)確定,以保證試驗(yàn)的靈敏度和特異性.酶聯(lián)免疫反應(yīng)是一種敏感性很高的反應(yīng),如果血清不稀釋,不可避免會產(chǎn)生很強(qiáng)的非特異性反應(yīng),出現(xiàn)假陽性.

2.試劑盒平衡 ；Elisa中所有試劑和板條均應(yīng)在試驗(yàn)前平衡至室溫(約25℃),一般需在室溫放置20～30分鐘以上.平衡時(shí)間太短會造成試劑混勻不夠,樣品孵育時(shí)間相對縮短,ELISA反應(yīng)不夠充分.冬季室溫低,可將試劑盒置37℃溫箱20分鐘.

3.洗板 ；固相免疫測定技術(shù)是一種非均相免疫測定技術(shù),需以洗滌操作將特異結(jié)合于固相的抗原或抗體與反應(yīng)溫育過程中吸附的非特異成份分離開來,以保證ELISA測定的特異性.洗液盡量不要溢出孔外；加洗液后要靜置1分鐘,甩去板孔中洗液后,一定要大力拍干；及時(shí)更換吸水紙,尤其是拍過酶標(biāo)記物的吸水紙一定要棄去,否則可能影響試驗(yàn)結(jié)果.

4.加樣 是一項(xiàng)很重要的步驟.加樣不可太快,要避免加在孔壁上部,不可濺出和產(chǎn)生氣泡.加樣太快,無法保證微量加樣的準(zhǔn)確性和均一性.加在孔壁上部的非包被區(qū),易導(dǎo)致非特異吸附.

5．溫育 是ELISA測定中影響測定成敗zui為關(guān)鍵的一個(gè)因素.ELISA作為一種固相免疫測定,抗原抗體的結(jié)合反應(yīng)在固相上進(jìn)行,要使液相中的抗原或抗體與固相上的特異抗體或抗原*結(jié)合,必須在一定的溫度條件下反應(yīng)一定的時(shí)間.