elisa檢測試劑盒實(shí)驗(yàn)要注意的重要事項(xiàng)
神經(jīng)特異性烯醇化酶(NSE)ELISA試劑盒血清：樣本室溫放置2小時(shí)或4℃過夜后取上清；血漿：可用EDTA、枸櫞酸鈉或肝素作為抗凝劑（根據(jù)試劑盒要求選擇），樣本加入10%抗凝劑混合10-20分鐘，2000-3000轉(zhuǎn)/分離心20分鐘后取上清；尿液、胸水、腹水、腦積液等：2000-3000轉(zhuǎn)/分離心20分鐘
特別提醒：
1.取樣和存樣所用的凍存管、離心管、吸頭等需高溫滅菌處理；2.所有存樣管口需以封口膜封好；3.所有樣品管壁需要用防水記號筆清晰標(biāo)明編號（便于區(qū)分即可）；4.所有樣品避免反復(fù)凍融5.如有特別要求，請與服務(wù)該區(qū)域的講明。
在神經(jīng)特異性烯醇化酶(NSE)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中，選擇好各項(xiàng)ELISA實(shí)驗(yàn)條件是很重要的，其中包括:(1) 固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進(jìn)行篩選：用等量抗原包被，在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng)，觀察其顯色反應(yīng)是否均一性，據(jù)此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被抗體(或抗原)的選擇：將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時(shí)，要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時(shí)間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18～24小時(shí)。蛋白質(zhì)包被的*適濃度需進(jìn)行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進(jìn)行包被后，在其它試驗(yàn)條件相同時(shí)，觀察陽性標(biāo)本的OD值。選擇OD值而蛋白量*少的濃度。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1～10μg/ml。
(3) 酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進(jìn)行初步效價(jià)的滴定(見酶標(biāo)記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。
(4) 酶的底物及供氫體的選擇：對供氫體的選擇要求是價(jià)廉、安全、有明顯地顯色反應(yīng)，而本身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用，應(yīng)注意防護(hù)。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時(shí)間后，應(yīng)加入強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時(shí)間，以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前加入。
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